本研究設(shè)計(jì)并構(gòu)建了一種由甲基丙烯?；髂z（Gel MA）和多巴胺（DA）通過(guò)光交聯(lián)形成的新型水凝膠（MEMC-Gel），該體系可同時(shí)封裝間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體（MSC-exo）與苦瓜源外泌體（MC-exo）。其治療機(jī)制并非單一通路，而是通過(guò)多種功能協(xié)同作用：MC-exo主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)局部血糖并降低晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）積累，而MSC-exo在促進(jìn)血管生成方面扮演主導(dǎo)角色；兩者與凝膠基質(zhì)協(xié)同，共同對(duì)抗氧化應(yīng)激、抑制慢性炎癥，并通過(guò)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞從促炎M1型向修復(fù)M2型極化，綜合優(yōu)化糖尿病傷口的微環(huán)境，從而加速愈合進(jìn)程。

作者采用超速離心法分別從MSC和苦瓜（Monorotica charantia）汁液中提取外泌體。透射電鏡（TEM）與粒徑分析證實(shí)，MSC-exo與MC-exo均呈現(xiàn)典型的納米級(jí)囊泡形態(tài)與尺寸分布，但MC-exo的平均直徑（~147.20 nm）顯著大于MSC-exo（~92.89 nm）。Western blot分析明確檢測(cè)到MSC-exo高表達(dá)CD9、CD81和CD63等跨膜蛋白，符合動(dòng)物源外泌體的經(jīng)典分子特征。對(duì)于目前缺乏統(tǒng)一標(biāo)志物的植物源MC-exo，研究通過(guò)SDS-PAGE揭示了其廣泛的蛋白組成（10-140 kD），并通過(guò)Triton X-100破膜實(shí)驗(yàn)證實(shí)其富含RNA，從多個(gè)維度驗(yàn)證了所提取囊泡的身份與完整性。

掃描電鏡（SEM）顯示，空白凝膠（B-Gel）與負(fù)載外泌體的MEMC-Gel均具有規(guī)整的多孔網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，且外泌體在MEMC-Gel中分散均勻。傅里葉變換紅外光譜（FTIR）表明，外泌體的引入未改變凝膠的主要化學(xué)結(jié)構(gòu)與晶體形態(tài)，說(shuō)明其與凝膠基質(zhì)間主要為物理封裝。流變學(xué)測(cè)試揭示MEMC-Gel具有典型的凝膠特性（儲(chǔ)能模量G'> 損耗模量G''）和剪切稀化行為，利于敷用。關(guān)鍵的是，多巴胺的引入顯著增強(qiáng)了水凝膠的粘附強(qiáng)度與親水性，而MEMC-Gel在降解實(shí)驗(yàn)中顯示出一周內(nèi)基本降解完畢的速率，并能以相近的速率同步、持續(xù)地釋放兩種外泌體，滿足傷口敷料對(duì)機(jī)械性能、貼合性與藥物控釋的核心要求。

細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)表明，MEMC-Gel不僅具有良好的生物相容性，更能顯著促進(jìn)成纖維細(xì)胞遷移與內(nèi)皮細(xì)胞成管，其中MSC-exo在促成管方面作用更為突出，而MC-exo也展現(xiàn)出明確的促進(jìn)遷移能力，兩者聯(lián)用體現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)。在抗氧化方面，MEMC-Gel能有效降低由Rosup誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平，并提升超氧化物歧化酶（SOD）活性、降低脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量。在抗炎與免疫調(diào)節(jié)方面，MEMC-Gel顯著抑制了由LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞釋放TNF-α、IL-1β等關(guān)鍵促炎因子，并通過(guò)免疫熒光證實(shí)其能下調(diào)M1型標(biāo)志物iNOS的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)M2型標(biāo)志物CD206的表達(dá)，證明其具有直接調(diào)控巨噬細(xì)胞極化為修復(fù)表型的能力。

通過(guò)活體成像技術(shù)追蹤C(jī)y5標(biāo)記的水凝膠，發(fā)現(xiàn)MEMC-Gel在糖尿病小鼠傷口部位的熒光信號(hào)在7天內(nèi)持續(xù)減弱，顯示其在此時(shí)間內(nèi)逐步降解。與此同時(shí)，利用不同熒光染料（PKH67和PKH26）分別標(biāo)記的MSC-exo與MC-exo，其從凝膠中的釋放曲線高度重合，均在3天內(nèi)釋放超過(guò)50%，并在7天內(nèi)持續(xù)釋放。該結(jié)果表明MEMC-Gel作為一種遞送系統(tǒng)，能確保兩種來(lái)源不同的外泌體在復(fù)雜的體內(nèi)環(huán)境中以協(xié)同的方式被同步遞送至傷口部位。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，MEMC-Gel治療組的傷口閉合速率顯著快于對(duì)照組及單一外泌體治療組（ME-Gel,MC-Gel），在第14天基本實(shí)現(xiàn)愈合。組織學(xué)分析進(jìn)一步揭示了其較高的修復(fù)質(zhì)量：H&E染色顯示MEMC-Gel組炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)最少，表皮再生與肉芽組織形成最為顯著；Masson染色則證實(shí)該組的膠原纖維沉積最致密、排列更有序。相比之下，ME-Gel在促進(jìn)膠原沉積方面優(yōu)于MC-Gel，但均不及MEMC-Gel的綜合效果，凸顯了兩種外泌體在促進(jìn)組織結(jié)構(gòu)性再生方面的互補(bǔ)與協(xié)同作用。

通過(guò)免疫組化(IHC)對(duì)髓過(guò)氧化物酶(MPO)的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)MEMC-Gel治療組傷口中的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)在愈合早期(第7天)即被顯著抑制。對(duì)傷口組織勻漿的 ELISA分析進(jìn)一步表明，MEMC-Gel不僅能持續(xù)性地降低促炎因子(INE-.IL-1P.IL-6)的度，還能顯著提升抗炎因子 IL-10 的水平。這種對(duì)炎癥平衡的雙向調(diào)節(jié)--即同時(shí)抑制促炎信號(hào)與增強(qiáng)抗炎信號(hào)--是 MEMC-Gel有效扭轉(zhuǎn)糖尿病傷口慢性炎癥微環(huán)境的關(guān)鍵機(jī)制。

二氫乙啶（DHE）熒光染色直接顯示，MEMC-Gel治療組傷口組織中的超氧陰離子水平顯著低于其他各組。對(duì)組織勻漿的生化分析提供了更深入的機(jī)制證據(jù)：MEMC-Gel治療顯著提升了內(nèi)源性抗氧化酶（如SOD）的活力和小分子抗氧化劑（谷胱甘肽，GSH）的水平，同時(shí)有效抑制了羥基自由基（·OH）的生成，并降低了脂質(zhì)過(guò)氧化終產(chǎn)物MDA的含量。這表明MEMC-Gel并非簡(jiǎn)單地清除已產(chǎn)生的ROS，而是通過(guò)增強(qiáng)組織自身的抗氧化防御能力，從根源上緩解氧化應(yīng)激。

免疫組化分析揭示，MEMC-Gel對(duì)傷口巨噬細(xì)胞極化表現(xiàn)出動(dòng)態(tài)且有效的調(diào)控：在愈合早期即可抑制M1型標(biāo)志物iNOS的表達(dá)，并在整個(gè)觀察期內(nèi)持續(xù)促進(jìn)M2型標(biāo)志物CD206的表達(dá)。同時(shí)，得益于MC-exo的降血糖特性，MEMC-Gel治療組傷口組織中的晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）積累顯著減少，從源頭上改善了不利于愈合的代謝微環(huán)境。在功能輸出上，這種優(yōu)化的微環(huán)境極大地促進(jìn)了血管生成，表現(xiàn)為CD31陽(yáng)性血管密度以及關(guān)鍵生長(zhǎng)因子VEGF和TGF-β1的表達(dá)在MEMC-Gel組中均達(dá)到峰值，其中MSC-exo被認(rèn)為是促成血管作用的主要貢獻(xiàn)者。這些結(jié)果共同表明，MEMC-Gel通過(guò)整合“免疫調(diào)節(jié)-代謝調(diào)控-血管再生"等多重機(jī)制，創(chuàng)造了較佳的愈傷微環(huán)境。