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標記細胞株要如何保存？

細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法，由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經傳代成功后即為細胞系，由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代，或傳代次數(shù)有限，可稱為有限細胞系，如可以連續(xù)培養(yǎng)，則稱為連續(xù)細胞系，培養(yǎng)50代以上并無限培養(yǎng)下去。所以細胞株是通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的具有特殊性質或標志的培養(yǎng)細胞。從培養(yǎng)代數(shù)來講，可培養(yǎng)到40-50代。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間...

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細胞培養(yǎng)基介紹

細胞培養(yǎng)基的概念01細胞培養(yǎng)基是人工模擬細胞在體內生長的營養(yǎng)環(huán)境，并提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的基礎物質。細胞培養(yǎng)基是細胞培養(yǎng)的基礎，它為動物細胞的健康快速成長提供營養(yǎng)物質。所以，只要用到細胞進行生物技術產品的生產制造，就勢必少不了細胞培養(yǎng)基。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基，英文都是medium。當它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常需補加血清、抗生素等成分。細胞培養(yǎng)基的分類02培養(yǎng)基主要有：天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基和無血清細胞培養(yǎng)基等。天然...

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C57小鼠皮膚成纖維細胞原代培養(yǎng)的方法

實驗方法1.將實驗小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。2.仔細剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。3.分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。4.將真皮部分于培養(yǎng)皿內剪碎，加入適量胰酶，轉移至15ml離心管內，37℃恒溫水浴消化1h。5.消化結束后，加入H-DMEM*培養(yǎng)基終止反應，1000rpm離心5min，棄上清。6.PBS清洗一遍，離心棄上清。7.將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內，加入2ml*...

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說說關于細胞外泌體研究的幾個重要問題

外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內含物（包括核酸、蛋白和脂質等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體廣泛存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，細胞外泌體研究是近些年研究的熱點。細胞外泌體主要原理是根據(jù)外泌體的密度、粒徑、沉降系數(shù)和親和力等差異進行分離，提取方法包括傳統(tǒng)的差速離心、密度梯度離心，以及后來發(fā)展的超濾法、聚合物沉淀法、免疫分離、隔離篩選法、體積排阻色譜法等。這些方法各有利弊。細胞外泌體研究常見問題：1、培養(yǎng)細胞...

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SD大鼠乳鼠心臟微血管內皮細胞原代分離培養(yǎng)方法

1.將新生24h的SD大鼠用75%乙醇浸泡5min，開胸，取出心臟后于含有雙抗的預冷過的D-HANKS中漂洗兩遍，移入超凈臺。2.仔細剪除大血管，左右心房及右心室和室間隔，保留左心室，去除內、外膜，PBS清洗。3.用眼科剪將心室肌剪碎至約1mm3，滴加1ml胎牛血清，均勻接種于6cm細胞培養(yǎng)皿內，組織塊間隔1-2mm，放入5%CO2，37℃恒溫培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。4.4小時后去除培養(yǎng)皿，加入3ml含有20%FBS和1%雙抗的H-DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。5.一般情況下48小時后可見...

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新生SD大鼠大腦皮層神經元原代分離培養(yǎng)方法

一.實驗方法1.多聚賴氨酸（Poly-D-Lysine）包被培養(yǎng)板的制備：原代分離進行前一天，用PBS緩沖液配制終濃度為0.1mg/ml的多聚賴氨酸工作液，0.22μm濾膜過濾除菌，于超凈工作臺內吸取1ml加入六孔板內，確保覆蓋板底，靜置孵育30min后吸出（可回收反復使用2-3次），用無菌水清洗培養(yǎng)板，置于超凈臺內晾干，照紫外過夜。2.次日，取出生24h以內的SD大鼠，75%乙醇浸泡消毒5min。3.棉球吸干乳鼠體表的乙醇，迅速斷頭，浸泡于冰冷的含有2%雙抗的PBS緩沖液中...

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原代細胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？

研究中常用的細胞系/株系是現(xiàn)成的，我們只需要進行細胞傳代和種子保存。然而，這些細胞系往往因長期體外培養(yǎng)而失去原有的生物學特性，對藥物治療的反應差距越來越大。因此，越來越多的人選擇原代細胞。來源于胚胎、組織、器官和外周血，經特殊分離方法制備的原代培養(yǎng)細胞稱為原代細胞。原代細胞培養(yǎng)，也稱為原代培養(yǎng)，是從供體獲得的組織細胞在體外的培養(yǎng)。原代細胞是接近和最能反映體內生長特性的細胞，適用于藥敏試驗、細胞分化等實驗研究。原代細胞分離培養(yǎng)都有哪幾種方法？1、組織培養(yǎng)法組織培養(yǎng)是一種常見、簡...

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充質干細胞涉及的研究竟然這么多

充質干細胞是人體內一類具有自我更新和多向分化潛能的原始細胞群。根據(jù)遺傳來源的分類，干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞。其中，胚胎干細胞具有發(fā)育全能性，是干細胞研究和應用中具吸引力的一種。然而，關于胚胎干細胞的研究一直存在倫理爭議。與胚胎干細胞相比，成體干細胞具有獲取方便、致瘤風險低、無倫理爭議等優(yōu)點。因此，成體干細胞已成為干細胞臨床應用研究的主要對象。在成體干細胞的許多臨床研究中，充質干細胞是最多的。間充質干細胞是一種來源于中胚層的成體干細胞，具有自我更新和多向分化的潛能。間...

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